一．检测标本中含有酶标记物的干扰物

    1．内源性干扰物：类风湿因子（RF）、黄疸、嗜异性抗体等。

    2．外源性干扰物：常常因样品采集、贮存、标本处理不当。如样品溶血、被细菌污染，标本离心不完全等。

    二．实验过程中的问题而造成假阳性

    1．洗涤：是将未反应的样品去除的过程。

    在ELISA中为保证得到可重复的结果，正确的洗涤是重要的一步，无论是手工操作、还是机器洗板（洗液瓶要经常清洗），得出不准确的结果常于不正确的洗涤有关。目前较常用的洗涤步骤有两种：一种是减少洗涤次数，增加每一次的浸泡时间；另一种浸泡时间短，增加洗涤次数。两种洗涤方法均可得到满意的结果。

    用手工操作时，如果吸水纸或毛巾不干净，会产生单点显色，所以应准备干净无粉尘的吸水纸和毛巾。其次使用洗板机时，如洗板不彻底，留有残液以及吸头被污物堵塞都会造成非特异性显色。目前大多数洗板机的残留量为≤5ul, 设计良好的洗板机可达≤2ul。此外，在使用机器前，应先用洗涤液清洗吸头，观察吸头工作是否正常，然后再进行洗涤步骤，洗涤完毕后，最好能用蒸馏水清洗吸头。

    2．加样器精密度不够：

    有些标本需要进行稀释。如果加样不准，会造成误差，尤其当稀释倍数大时，会导致较大的相对误差，使阴性（或弱阳性）标本呈阳性（或阴性）。加样器的定期校验和日常保养，是避免出现此类问题的方法。一般要求实验用加样器的误差±5％。

    3．酶标仪判读误差：

    作为记录测定结果的仪器，酶标仪的性能与否，决定了记录的可靠度。首先酶标仪应定期进行保养、验证，放置在有防尘、防震、防潮设施，并无阳光直射的位置。其次酶标仪波长设置要正确，最好使用双波长：一个是检测波长、一个是参比波长。如果没有参比波长，微孔板底部划痕、不平、厚薄不均可造成吸光值读数升高；溶液组分未混匀，每孔的液面高度的差异也可以引起误差。在酶标仪读数前，擦拭板底部，并注意板条是否平整。因电压波动，酶标仪判度也会引起：不显色的孔判为阳性。所以打印后，应再目测对比一下结果。  

    4．操作的失误：

    客户在严格按说明书进行实验操作的同时，温度和温育时间的控制是重要环节，如温度高、反应时间长，都将会造成整板本底高、阳性率高。

    在实验过程中，有很多的非特异性显色而影响检测结果的判定，以上的措施可以使非特异性显色将至最低限度，从而提高检测的特异性，并得到更准确、可靠的实验结果。

    摘自《输血检验》